Le fonctionnement et les performances d’un microscope confocal dépendent d’une multitude de facteurs.
Au sein d’un microscope confocal, un sténopé est placé devant l’élément récepteur de lumière afin de bloquer la lumière ambiante et issue de zones en dehors du plan focal. Ainsi, le microscope détecte la hauteur réelle de l’objet à partir de la position d’où est réfléchie la plus grande quantité de lumière.
La section suivante explique le principe confocal en quatre étapes.
Transmission de lumière du microscope confocal à la cible via l’objectif.
L’objectif concentre la lumière au point focal sur la surface à mesurer.
Le semi-miroir détourne la lumière réfléchie vers l’élément récepteur de lumière.
La cible positionnée au point focal réfléchit la lumière émise par le microscope confocal en direction d’un semi-miroir, qui détourne la lumière réfléchie vers l’élément récepteur de lumière.
L’objet mesuré par le microscope confocal se trouve au point focal : la lumière laser est concentrée au moyen du sténopé.
La lumière traverse le sténopé, de sorte que toute la lumière réfléchie percute l’élément récepteur de lumière du microscope confocal.
Seule la lumière traversant le sténopé atteint l’élément récepteur de lumière, le reste est absorbé par la zone de masque
Si la cible ne se trouve pas au point focal, la lumière est focalisée en un point décalé par rapport au sténopé et le faisceau est alors plus large que l’ouverture du sténopé. La quantité de lumière atteignant l'élément récepteur de lumière est ainsi réduite. Le microscope confocal détecte si la cible se trouve au point focal à partir de la quantité de lumière réfléchie reçue par l'élément récepteur de lumière. En effet, seule la lumière réfléchie par les zones de la cible situées dans le plan focal atteint l’élément récepteur de lumière.
Glossaire de la Microscopie